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    灵芝lz8基因的克隆和原核表达及LZ-8蛋白的免疫印迹检测


    【发布日期】:2018-06-19  【来源】:菌物学报
    【作者】丁一新 赵明文
    【机构】南京农业大学生命科学学院农业部农业微生物环境工程重点开放实验室南京农业大学生命科学学院农业部农业微生物环境工程重点开放实验室 南京210095
    【摘要】根据已报道的lz8基因序列设计引物,以灵芝基因组DNA为模板,PCR扩增获得lz8基因。构建了原核表达载体pET30a-lz8,转化原核表达宿主菌RosettaDE3,IPTG诱导融合蛋白表达,并用Ni-NTA亲和层析柱对LZ-8蛋白进行分离纯化。将纯化的LZ-8蛋白用Freund佐剂乳化后注射到新西兰白兔体内,经数次加强免疫后采血分离抗血清,并以抗血清为探针建立了LZ-8蛋白的免疫印迹法定性检测方法。 
    【基金】国家自然科学基金(30300006,30571294); 江苏省自然科学基金创新人才项目(BK2006517)资助;
    【关键词】载体构建; 异源表达; Western杂交;
     
     
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