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    SEFA-PCR法克隆灵芝鲨烯合酶基因启动子及其序列分析


    【发布日期】:2018-06-19  【来源】:菌物学报
    【作者】李娜 王世明 陈军 李玉祥 赵明文
    【机构】南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室 南京210095
    【摘要】鲨烯合酶是灵芝三萜生物合成的关键酶,灵芝鲨烯合酶基因的表达和活性的高低决定了灵芝中三萜含量的高低。根据已经获得的灵芝鲨烯合酶全长cDNA序列设计一对专一引物,通过PCR扩增得到了灵芝鲨烯合酶基因的基因组全长,序列长1984bp,含有3个内含子。根据其基因组序列设计引物,采用SEFA-PCR的方法,以总DNA为模板,克隆了灵芝鲨烯合酶基因的启动子序列,长1042bp。序列分析发现灵芝鲨烯合酶基因启动子中没有明显的TATA和CAAT框,但是含有CCAAT-bindingfactor、GATA-1、GC-box、TFⅡD等重要的转录因子的结合位点,以及在人和酿酒酵母鲨烯合酶基因启动子中发现的甾醇调节相关的顺式调控元件。 
    【基金】国家自然科学基金(30300006,30571294); 江苏省自然科学基金创新人才项目(BK2006517)资助;
    【关键词】灵芝三萜; 生物合成; 转录调控;
     
     
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