首先由真空泵组将灭菌锅抽取真空，灭菌锅内的空气压力的不断降低，达到设定时间值，真空泵组停止，打开锅炉送来蒸汽的阀门，使得灭菌锅内菌包迅速升温，等到灭菌锅内温度上升到50℃左右后，关闭进蒸汽的阀门，并再次由真空泵组将灭菌锅抽真空，当真空度在0.08～0.09mpa之间, 再次关闭真空泵组，并打开锅炉送来蒸汽的阀门，使得灭菌锅内迅速升温到125℃左右后,进行保温保压。当灭菌锅内菌包的中心温度保持≥120℃达到设定时间值后，灭菌系统开始报警，以示菌包灭菌工作结束。此时打开排气阀门，降低灭菌锅内气压，直到灭菌锅内气压为零 。
