银耳芽孢内源gpd启动子的克隆与功能鉴定
Isolation and Functional Analysis of a Gpd-Tf Promoter from Yeast-like Conidia of Tremella fuciformis
【作者】 聂燕华； 林俊芳； 王杰； 尤琳烽； 郭丽琼；
【Author】 NIE Yanhua1,2,LIN Junfang1,3,WANG Jie1,3,YOU Linfeng1,3,GUO Liqiong1,31College of Food Sciences,South China Agricultural University,Guangzhou,Guangdong 510640,China;2Department of Tropical Crops,Guangdong AIB Polytechnic University,Guangzhou,Guangdong 510507,China; 3Institute of Biomass Research,South China Agricultural University,Guangzhou,Guangdong 510640,China
【机构】 华南农业大学食品学院生物工程系； 广东农工商职业技术学院热作系； 华南农业大学生物质能研究所；
【摘要】 利用反向长距离PCR技术从银耳(Tremellafuciformis)芽孢gpd基因出发克隆上游gpd启动子序列,将预测的gpd启动子片段与多功能纤维素基因(mfc)连接构建表达载体,与潮霉素抗性质粒pBgGl-hph共转化银耳芽孢,对拟共转化子进行酶活发酵试验。结果表明:4轮反向长距离PCR克隆得到了1761bp的上游序列,经预测启动子落在上游1000bp左右区域内,包含两个高分值的起始转录位点,将gpd启动子分成gpd-Tre1(885bp)、gpd-Tre2(708bp)、gpd-Tre3(466bp)3段区域,分别与多功能纤维素基因(mfc)构建表达载体pgTre1-mfc、pgTre2-mfc和pgTre3-mfc。拟共转化子酶活发酵试验结果发现3个表达载体的转化子均能检测到多功能纤维素酶活,转化子T1-2包含gpd-Tre1启动子大片段,整体酶活最高,CMC酶活为14.12U/mL,比出发菌株Tr01提高34.3%,比工程菌株yLes3提高25.7%,木聚糖酶活为34.8U/mL,比Tr01酶活提高26.3%,略低于yLes3。3个启动子片段均具有表达活性,相比之下885b...
【Abstract】 A 1761 bp upper flanking sequence of the gpd promoter was isolated from yeast-like conidia of Tremella fuciformis by a four-step amplification using long distance inverse PCR(LD-IPCR).After sequence analysis,expression vectors were constructed with the gpd promoter and a multi-function cellulase gene(mfc),and co-transformed into the yeast-like conidia with the hygromycin resistance plasmid pBgGl-hph.This sequence contained the gpd promoter,which was located in the upper 1000 bp,together with two...
【关键词】 银耳； 芽孢； gpd启动子； 反向长距离PCR； 多功能纤维素酶；
【Key words】 Tremella fuciformis； yeast-like conidia； gpd promoter； long distance inverse PCR； multi-functional cellulase；
【基金】 国家高技术研究发展计划(编号:2006AA10Z301);国家自然科学基金(编号:30371000,30671457)的部分研究内容
【分类号】S567.34