【作者】赖卫华 许杨 熊勇华
【机构】教育部食品科学重点实验室南昌大学食品科学工程系 教育部食品科学重点实验室.中德联合研究院教育部食品科学重点实验室.中德联合研究院 南昌330047
【摘要】应用抑制性消减杂交技术,构建红曲菌产桔霉素和不产桔霉素差异表达的cDNA消减文库。分别从产桔霉素和不产桔霉素的红曲菌丝体中提取mRNA,依次合成单链和双链cDNA,经酶切成大小为250~750bp的片断,将产桔霉素的cDNA分为两组,分别与两种不同的接头连接,再与不产桔霉素的红曲菌的cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR后,将产物与T/A载体连接构建成功cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,文库扩增后得到283个克隆,经PCR法快速测定,均得到250~750bp的插入片断。所构建的红曲菌cDNA消减文库为进一步筛选红曲菌中与产桔霉素性状相关的基因奠定了基础。
【基金】国家自然科学基金资助项目；
【关键词】桔霉素; 抑制性消减杂交; 聚合酶链式反应;