【作者】张雷刚 罗淑芬 周宏胜 胡花丽 李鹏霞
【机构】江苏省农业科学院农产品加工研究所江苏省农业科学院园艺产品产后处理工程实验室
摘要：以生防真菌黑附球菌原生质体为受体、潮霉素抗性基因(hph)为筛选标记,应用PEG介导法进行了遗传转化体系的研究。潮霉素敏感性测试结果表明,黑附球菌对潮霉素的耐受浓度为50mg/L。PEG介导的黑附球菌原生质体最佳遗传转化体系为:30℃下用2%裂解酶酶解黑附球菌菌丝2h,过滤收集原生质体,经MTC清洗重悬后将质粒p YF11-hph转化黑附球菌原生质体,在RM培养基中混匀再生;经潮霉素药剂筛选和PCR验证,表明外源基因hph已转入到黑附球菌中并获得稳定表达。本实验成功地建立了稳定的PEG介导的黑附球菌遗传转化体系,为研究其代谢途径、生防机制及构建工程菌株提供了技术保障。
基金：农作物生物灾害综合治理教育部重点实验室/农业部华东作物有害生物综合治理重点实验室开放基金； 江苏省农业科技自主创新资金[CX(17)3012]~~；
关键词：PEG介导; 黑附球菌; 遗传转化; 原生质体; 工程菌株;