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依赖于DNA的RNA聚合酶与体外转录的研究 Ⅰ.酵母变异株20B-12 RNA聚合酶A和C的纯化及鉴定

来源:菌物学报日期:2017-12-18 正文 422 字 · 阅读约 1 分钟333 阅读微博QQ空间复制链接
◆ 内容导读文献 · 第四期

【作者】张渝英;刘年娟;杨开宇; 【机构】中国科学院微生物研究所;中国科学院微生物研究所;北京; 【摘要】从酵母变异株20B-12经过超声波处理、硫酸铵沉淀、DEAE纤维素和磷酸纤维素层析等步骤,纯化依赖于DNA的RNA聚合酶A和C,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的条带。其中不含DNase、RNase 和蛋白酶活力,无内源DNA。测定了 RNA 聚合酶A和C对α-鹅膏荤碱的敏感性。酶A在α-鹅膏荤碱为400μg/ml时,活性受到抑制,而酶C在该浓度时,几乎不受抑制。(NH4)2S... 关键词:依赖于DNA的RNA聚合酶、酿酒酵母变异株20B-12、RNA、聚合酶的…

【作者】张渝英;刘年娟;杨开宇;
【机构】中国科学院微生物研究所;中国科学院微生物研究所;北京;
【摘要】从酵母变异株20B-12经过超声波处理、硫酸铵沉淀、DEAE纤维素和磷酸纤维素层析等步骤,纯化依赖于DNA的RNA聚合酶A和C,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的条带。其中不含DNase、RNase 和蛋白酶活力,无内源DNA。测定了 RNA 聚合酶A和C对α-鹅膏荤碱的敏感性。酶A在α-鹅膏荤碱为400μg/ml时,活性受到抑制,而酶C在该浓度时,几乎不受抑制。(NH4)2SO4对酶A的最适浓度为20mM,对酶C有二个最适浓度,分别为40mM和240mM。无二价金属离子Mn2+或Mg2+,酶A和C几乎无活力。两种酶最适Mn2+浓度均为2.5mM,Mg2+浓度均为5mM。两种酶以热变性小牛胸腺DNA为模板,测活性均较天然小牛胸腺DNA为模板时高。 
【关键词】依赖于DNA的RNA聚合酶;酿酒酵母变异株20B-12;RNA 聚合酶的纯化;
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