【作者】戚元成张倩薛元邱立友申进文
【机构】河南农业大学生命科学学院
【摘要】为解析糙皮侧耳原基期与菌丝期差异表达的基因,本研究以原基期c DNA为检测子(tester)、双核菌丝期c DNA为驱赶子(driver),采用抑制性消减杂交法(suppression subtractive hybridization,SSH)构建了糙皮侧耳SSH c DNA文库。菌液PCR验证SSH c DNA文库插入c DNA片段后,挑取了2 055个差异转化子,差异转化子经3次反向Northern杂交筛选,得423个信号差异显著的克隆;阳性克隆测序后,经NCBI数据库Blastn和Blastx比对,共得206条差异表达序列(expressed sequence tag,EST),重复序列去除后,有46个基因参与了细胞急救和防御、能量代谢、转录和蛋白调控、膜蛋白和信号转导,18个基因编码未知功能的推定蛋白,5个无任何同源性的新基因。挑取10个差异表达基因进行半定量RT-PCR,发现这些序列在原基期的表达水平显著高于菌丝期。结果表明,本研究成功构建了糙皮侧耳原基期与菌丝期SSH c DNA文库,为进一步分离糙皮侧耳生长发育相关基因并研究糙皮侧耳的发育机制奠定了基础。
【基金】国家现代农业产业技术体系专项资金(CARS-24)； 河南省高等学校重点科研项目(13B180051)； 河南省高等学校重点科研项目(14A180023)~~；
【关键词】糙皮侧耳; 抑制性消减杂交cDNA文库; 异表达基因; 反向Northern blot; 半定量RT-PCR;
