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    CTAB法提取食用菌DNA


    【发布日期】:2011-07-01

    参考:王关林,方宏筠主编,植物基因工程[M].第2版,北京:科学出版社,2002,742-744.

    1)        取1克菌丝放入研钵,加入液氮迅速研磨成粉末,转入7 mL的离心管,加2.5mL 65℃预热的抽提液(2 %(m/v)CTAB,100m mol/L Tris-HCl PH8.0,20mmol/L EDTA PH8.0,1.4mol/L NaCl),加巯基乙醇50μl,震荡,使蛋白质变性沉淀;

    2)        65℃水浴1 h,每隔10 min振荡1次,加入2.5 mL的氯仿/异戊醇(24/1)混匀,除去蛋白质;

    3)        8000 rpm,4℃离心10 min,取上清;

    4)        加1/5体积65 ℃预热的CTAB/NaCl混匀,加入2.5 mL的氯仿:异戊醇(24:1)混匀;

    5)        10000 rpm, 4℃离心10 min,取上清,加入2.5 ml的CTAB沉淀液,颠倒,混匀。65℃水浴1.5h至沉淀可见;

    6)        12000 rpm,4℃离心10 min后,去除上清液,用0.5ml无菌水溶解沉淀10 min;

    7)        加入0.25 mL饱和酚和0.25 mL氯仿:异戊醇(24:1),混匀;

    8)        12000 rpm,4℃离心10 min,取上清,加入2倍体积预冷的无水乙醇,混匀,-20 ℃冰箱放置30 min;

    9)        12000 rpm,4℃离心10 min;弃上清,加70%乙醇洗涤沉淀2次,自然风干,再加100μlTE溶解,-20 ℃保存备用。

     

     
     
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