参考:王关林,方宏筠主编,植物基因工程[M].第2版,北京:科学出版社,2002,742-744.
1) 取1克菌丝放入研钵,加入液氮迅速研磨成粉末,转入7 mL的离心管,加2.5mL 65℃预热的抽提液(2 %(m/v)CTAB,100m mol/L Tris-HCl PH8.0,20mmol/L EDTA PH8.0,1.4mol/L NaCl),加巯基乙醇50μl,震荡,使蛋白质变性沉淀;
2) 65℃水浴1 h,每隔10 min振荡1次,加入2.5 mL的氯仿/异戊醇(24/1)混匀,除去蛋白质;
3) 8000 rpm,4℃离心10 min,取上清;
4) 加1/5体积65 ℃预热的CTAB/NaCl混匀,加入2.5 mL的氯仿:异戊醇(24:1)混匀;
5) 10000 rpm, 4℃离心10 min,取上清,加入2.5 ml的CTAB沉淀液,颠倒,混匀。65℃水浴1.5h至沉淀可见;
6) 12000 rpm,4℃离心10 min后,去除上清液,用0.5ml无菌水溶解沉淀10 min;
7) 加入0.25 mL饱和酚和0.25 mL氯仿:异戊醇(24:1),混匀;
8) 12000 rpm,4℃离心10 min,取上清,加入2倍体积预冷的无水乙醇,混匀,-20 ℃冰箱放置30 min;
9) 12000 rpm,4℃离心10 min;弃上清,加70%乙醇洗涤沉淀2次,自然风干,再加100μlTE溶解,-20 ℃保存备用。