中国栽培白灵菇学名的订正
黄晨阳1, 陈强1, 邓旺秋2, 李泰辉2, 高巍1, 张金霞1*
摘要：采用形态学方法对采集于新疆野生的阿魏蘑标本进行分类鉴定，结果表明其形态学特征符合刺芹侧耳托里变种Pleurotus eryngii var. tuoliensis的特征范围，它与欧洲已报道的Pleurotus nebrodensis有明显的差异。此外本研究还采用分子生物学方法对从该野生样品分离的菌株CCMSSC 02514进行了rDNA ITS序列分析，结果表明它与我国栽培白灵菇菌种CCMSSC 00973、KH5和AFRL 6022完全相同，以此构建系统发育树，将我国栽培白灵菇种质与意大利的Pleurotusnebrodensis、Pleurotus eryngii var. ferulae以及来自荷兰的Pleurotuseryngii等截然分为两组。因此，形态学和rDNA ITS序列分析结果支持我国栽培的白灵菇与欧洲的Pleurotusnebrodensis为不同种，我国的白灵菇是刺芹侧耳独立进化的一个分支，其名称应该为刺芹侧耳托里变种Pleurotus eryngii var. tuoliensis。
关键词：白灵侧耳；鉴定；形态学；ITS
Correct Name for Cultivated Bai-Ling-Gu in China
HUANG Chen-yang1, CHEN Qiang1, DENG Wang-qiu2, LI Tai-hui2, GAO Wei1, ZHANG Jin-xia1
(1Institute of Agricultural Resources and Regional Planning, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081;
2Guangdong Provincial Public Laboratory of New Microbial Application Technology, Guangdong Key Laboratory of Microbial Culture Collection and Application, Guangdong Institute of Microbiology, Guangzhou 510070)
Abstract:A wild A-Wei-Mo specimen collected from Xinjiang was identificated with morphological methods. The results showed that it was consistent with the morphological characteristics of Pleurotus eryngii var. tuoliensis, but different from those of Pleurotus nebrodensis reported in Europe. In addition, the strain CCMSSC 02514 isolated from the wild mushroom specimen was analyzed with molecular menthods. Based on rDNA ITS sequences from the phylogenetic tree, the relationship among Bai-Ling-Gu in China, Pleurotus nebrodensis and Pleurotus eryngii var. ferulae in Italy, and Pleurotus eryngii are analyzed. The rDNA ITS sequences of CCMSSC 02514 and Pleurotus eryngii var. tuoliensis AFRL 6022 are identical. Combined with morphology and rDNA ITS sequence analysis, we considered that Bai-Ling-Gu in China is different from the European Pleurotus nebrodensis, and the former is a branch of Pleurotus eryngii evolved independently in China. The scientific name for the Chinese Bai-Ling-Gu in China should be Pleurotus eryngii var. tuoliensis.
Key words: Pleurotus eryngii var. tuoliensis; Identification; Morphology; ITS
Pleurotus nebrodensis（Inzenga）Quél.最早采于意大利西西里，Inzenga[1]将其定名为Agaricus nebrodensisInzenga，Quélet[2]将其组合为Pleurotus nebrodensis（Inzenga）Quél.。Venturella 等[3]野外调查发现，意大利西西里分布的绵果芹植物Cachrys ferulacea根上发生的侧耳才是模式标本记载的P. nebrodensis，其发生与C. ferulacea的自然分布相关，严格弱寄生或腐生在海拔1200~2000m的C. ferulacea上，C. ferulacea是P. nebrodensis的唯一宿主。真菌分类学家对发生在C. ferulacea上的这一真菌的分类地位一直有着分歧，分别将其作为刺芹侧耳的变种P. eryngii var. nebrodensis[4]或独立物种P. nebrodensis[3,5]。
自然生长在我国新疆的阿魏Ferula sinkiangensis K.M. Shen根上的侧耳被当地人称为阿魏蘑，自然分布于新疆塔城、阿尔泰、木垒等地有新疆阿魏分布的荒滩上，分布海拔800~900m[6]。最初记载为Pleurotus ferulae Lanzi[7]，后来根据其子实体形态和菌丝培养特征的差别，又有刺芹侧耳阿魏变种Pleurotus eryngii var. ferulae Lanzi、刺芹侧耳托里变种Pleurotus eryngii var. tuoliensis C.J. Mou[6]、刺芹侧耳白阿魏变种Pleurotus eryngii (DC.) Quél.var. nebrodensis Inzenga的记载[8]。而“白灵菇”这一商品名称，来自1997年北京金信食用菌有限公司从新疆购进阿魏蘑菌袋，在北京大面积出菇成功，卯晓岚先生鉴定其为白灵侧耳Pleurotus nebrodensis，并记载于2000年出版的《中国大型真菌》中[9]。但是单孢杂交配对表明阿魏侧耳与白灵侧耳属于同一种下的变种[10]。
目前，我国栽培白灵菇学名采用较多的是P. nebrodensis，然而Kawai等[11]对我国的白灵菇与意大利的P. nebrodensis及德国和捷克的P. eryngii进行交配、栽培及rDNA ITS序列比对，认为我国的白灵菇与P. nebrodensis不同，是P. eryngii的一个变种。
本研究以新疆野生的阿魏蘑标本为材料，进行了形态鉴定，并将其rDNA ITS序列与我国栽培白灵菇及国外的相关菌株进行比对，探讨我国栽培白灵菇的分类学名称。
1 材料与方法
1.1 材料
野生阿魏蘑材料为2009年4月采集于新疆塔城地区裕民县，并分离获得其菌株，菌种保藏于国家标准菌株库（China Center for Mushroom Spawn Standards and Control，CCMSSC），菌种保藏号为CCMSSC 02514；子实体标本保藏于广东省微生物研究所真菌标本馆（Herbarium of Guangdong Institute of Microbiology，GDGM），标本号为GDGM 27082。在GenBank中下载P. nebrodensis、P. eryngii var. ferulae、P. eryngii、P. eryngii var.tuoliensis、P. ostreatus的rDNA ITS序列，菌株来源及其ITS序列的GenBank登录号见表1。
表1 供试菌株及其ITS登录号
Table 1 The locality and ITS sequence accession numbers of tested strains
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菌株号
Strain no.
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拉丁学名
Species
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来源
Locality
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GenBank登录号
GenBank accession no.
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CCMSSC 02514
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P. eryngii var. tuoliensis
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新疆 Xinjiang
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HM 777041
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CCMSSC 00973
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P. nebrodensis
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新疆 Xinjiang
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FJ873701.1
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KH5
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P. nebrodensis
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新疆 Xinjiang
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FJ572270.1
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AFRL 6022
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P. eryngii
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河北←新疆 Hebei←Xinjiang
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AB286171.1
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DS201
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P. nebrodensis
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意大利 Italy
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AB286162
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DS260
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P. nebrodensis
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意大利 Italy
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AB286156
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DS247
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P. eryngii var. ferulae
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意大利 Italy
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AB286158
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CBS 613.91
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P. eryngii
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CBS, the Netherlands
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EU424296
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CBS 375.51
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P. ostreatus
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CBS, the Netherlands
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EU424310
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1.2 方法
1.2.1形态观察 在野外观察和记录新鲜样品的外观形态特征，并将样品于40~50℃下烘干。用刀片将样品组织块切成薄片，置于5%的氢氧化钾溶液中复水；小心轻按组织块，除去组织块中的空气，盖上盖玻片；在光学显微镜下观察样品的显微特征。担孢子的长或宽以(a)b~c(d)表示，90%的测量数值落在b~c之间，a、d分别为测量数据中的最小值和最大值；担孢子的长宽比用Q表示，而Q为多个担孢子长宽比的算术平均值。
1.2.2总DNA的提取 野生菌株子实体进行组织分离，获得双核菌丝纯培养物，培养基上隔膜培养，刮取菌丝体。采用CTAB法提取基因组DNA，0.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量，紫外分光光度计检测DNA浓度，于-20℃保存。
1.2.3 rDNA ITS序列的获得 反应体系采用黄晨阳等[12]的方法，引物合成及测序由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。
1.2.4系统发育分析 以糙皮侧耳Pleurotus ostreatus (Jacq.) P. Kumm.为外群，进行系统发育关系分析。采用MEGA 4.0[13]对rDNA ITS序列片段进行比对，人工调整比对结果，用邻近法和最大简约法构建系统发育树。
2结果与分析
2.1 形态特征
菌盖匙形、扇形，菌盖直径3.2cm，白色夹乳酪斑，边缘内卷，中间凸，不粘，菌盖表面有块鳞，龟裂，菌肉白色，厚。菌褶白色，密，延生，宽度1~2mm。菌柄侧生，白色，长2.9cm，粗0.7cm，上部粗而基部较细，实心（图1）。孢子无色，椭圆形和长椭圆形，有油滴，大小为（9）10~14 μm×（4.2）5~6 μm。Q = 2.0~2.5 (Q= 2.2 ± 0.21)
图1 刺芹侧耳托里变种CCMSSC 02514的子实体（GDGM 27082）
Fig.. 1 Fruitbodies of P. eryngii var. tuoliensis (GDGM 27082).
生境：寄生或腐生于伞形科植物新疆阿魏F. sinkiangensis的根上。
研究标本信息：采集于新疆塔城地区裕民县砖厂附近，海拔735m，2009年4月22日，采集人陈强，标本号GDGM 27082，标本保存于广东省微生物研究所真菌标本馆。
2.2 系统发育分析
经过MEGA 4.0比对和人工调整，最后得到615个同源位点，邻近法和最大简约法构建的系统发育树结构一致。以最大简约法生成的树为例，作为外群的糙皮侧耳与其他8个菌株完全分开。而来自新疆的4个菌株聚在同一组，来自意大利的P. nebrodensis、P. eryngii var. ferulae与来自CBS的P. eryngii聚为另一组，两组的节点支持率分别达到100%和96%。在组内意大利的P. nebrodensis和P. eryngii var. ferulae聚为一小组，再与荷兰的P. eryngii聚为同组（图2）。
图2 基于ITS序列的系统发育树（最大简约法）分析
Fig. 2 The molecular phylogenetic analyses based on ITS with maximum parsimony method
3讨论
从形态学上，标本GDGM 27082主要特征是子实体扇形，白色，菌盖表面龟裂，菌柄侧生，孢子大小为（10~14）μm×（5~6）μm，符合刺芹侧耳托里变种P. eryngii var. tuoliensis的特征范围[6]；且与P. eryngii var. tuoliensis同采集于伞形科植物新疆阿魏F. sinkiangensis上，根据国际植物命名法规（International Code of Botanical Nomenclature, ICBN）的规定，菌株CCMSSC 02514应使用学名刺芹侧耳托里变种P. eryngii var. tuoliensis。而欧洲的P. nebrodensis担孢子的大小为（15~18）μm×（6~8）μm[3]；阿魏侧耳P. ferulae菌盖初期褐色，菌柄为中至偏生，担孢子大小（12~14）μm×（5~6）μm[14]；刺芹侧耳P. eryngii菌盖墨灰色至淡黄色，担孢子大小（9.58~12.5）μm×（5~6.25）μm[8]。从形态学及担孢子特征看，P. eryngii var. tuoliensis与以上3种侧耳是不同的。
基于rDNA ITS序列构建的系统发育树，CCMSSC 02514与我国栽培白灵菇CCMSSC 00973、KH5的ITS序列完全相同，与菌株AFRL 6022的ITS序列也完全相同，虽然在GenBank中提交的学名为P. eryngii，但Kawai等[11]在文中将AFRL 6022作为P. eryngii var. tuoliensis研究分析。我国栽培白灵菇与意大利的P. nebrodensis、P. eryngii var. ferulae及来自CBS的P. eryngii遗传差异比较大。
结合形态学观察和rDNA ITS序列分析，我国的白灵菇与欧洲的P. nebrodensis应为不同的物种，它是刺芹侧耳在中国独立进化的一个分支，其名称应该为刺芹侧耳托里变种P. eryngii var. tuoliensis。戴玉成等[15]在中国食用菌名录中也曾将白灵侧耳也处理为P. nebrodensis，实际上也应该为刺芹侧耳托里变种P. eryngii var. tuoliensis。
[参考文献]
[1] Inzenga G. Nuova specie di agarico del Prof. Giuseppe Inzenga [J]. Giorn Reale Ist Incoragg Agric Sicil Palermo, 1863, 1: 161-164
[2] Quélet L. Enchiridion Fungorum in Europa Media et Praesertim in Gallia Vigentium [M]. Paris, 1886: 148
[3] Venturella G, Zervakis G, Rocca S L. Pleurotus eryngii var. elaeoselini var. nov. from Sicily [J]. Mycotaxon, 2000, 76: 419-427
[4] Moser M. Keys to Agarics and Boleti (Polyporales, Boletales, Agaricales, Russulales) [M]. London: Roger Phillips, 1983
[5] Candusso M, Basso M T. Comparative analysis of Pleurotus eryngii and P. nebrodensis [J]. Docum Mycol, 1995, 100: 119-128
[6] 牟川静, 曹玉清, 马金莲. 阿魏侧耳一新变种及其培养特性[J]. 真菌学报, 1987, 6(3): 153-156
[7] 邓叔群. 中国的真菌[M]. 北京：科学出版社, 1963: 580
[8] 黄年来. 18种珍稀美味食用菌栽培[M]. 北京：中国农业出版社, 1996
[9] 贾身茂, 秦淼. 我国白阿魏蘑的驯化与栽培[J]. 中国食用菌, 2006, 25(3): 3-7
[10] 刘洲君, 王卓仁, 肖美丽, 等. 白灵菇与阿魏侧耳杂交F1代培养性状观察 [C]//中国（广水）食用菌标准化生产研讨会暨珍稀菇品(白灵菇)交易会论文集, 2005
[11] Kawai G, Babasaki K, Neda H. Taxonomic position of a Chinese Pleurotus “Bai-Ling-Gu”: it belongs to Pleurotus eryngii (DC.: Fr.) Quél. and evolved independently in China [J]. Mycoscience, 2008, 49: 75-87
[12] 黄晨阳, 陈强, 高山, 等. 侧耳属主要种类ITS序列分析[J]. 菌物学报, 2010, 29: 365-372
[13] Tamura K, Dudley J, Nei M, et al. MEGA4: molecular evolutionary genetics analysis (MEGA) software version 4.0 [J]. Mol Biol Evol, 2007, 24: 1596-1599
[14]卯晓岚. 中国大型真菌[M]. 郑州：河南科技出版社, 2000
[15] 戴玉成, 周丽伟, 杨祝良, 等. 中国食用菌名录[J]. 菌物学报, 2010, 29: 1-21
*收稿日期: 2010-11-17 修回日期：2010-12-17
基金项目：公益性行业（农业）科研专项（3-27）
作者简介：黄晨阳，博士，主要从事食用菌遗传育种研究。
通讯作者：张金霞，研究员。E-mail: zhangjx1210@yahoo.com.cn
