1.酸碱度调节
一般用10%盐酸或10%氢氧化钠调pH值。用pH值试纸进行测试。调pH值时要小心，一滴一滴地加酸或碱，不要调得过酸或过碱，以避免某些营养成分被破坏。
在食用菌菌丝生长过程中，菌丝将碳水化合物分解成有机酸类，使培养基逐渐呈酸性；另外，有机酸类被同化后，培养基逐渐呈碱性。为防止培养基酸碱度出现大的波动，常在培养基中加人少量磷酸盐作为缓冲液。
2.分装
培养基配好后，趁热将其按需要分装于三角瓶或试管内，以免琼脂冷凝。温度低时，要保温分装。分装时应避免培养基黏附管口或瓶口。琼脂若黏着棉塞，会影响接种，还易引起杂菌滋生。分装用漏斗或橡胶管进行。装入三角瓶的培养基量，一般不要超过瓶容量的1/3；装入试管中的量，最好不要超过管长的1/5。
3.塞棉塞
分装后，塞好棉塞。做棉塞用普通棉花，不要用脱脂棉。棉塞的作用是既通气又过滤空气，避免杂菌污染培养基。
塞入试管的棉塞要紧贴管壁，不留缝隙，大小、松紧均匀适度。检查松紧的方法是：将棉塞提起，试管跟着被提起而不下滑，表明棉塞不松；将棉塞拔出，可听到有轻微的声音而不明显，表明棉塞不紧。
4.捆把
棉塞塞好后，每7支同样规格的试管包扎成1把，试管棉塞部分要包上一层牛皮纸或双层报纸，用绳捆扎在管壁或瓶颈上。包纸的作用是避免灭菌时冷凝水淋湿棉塞，并防止接种前培养基水分散失或被杂菌污染。
5.灭菌
试管包扎好后，放人铁丝筐中，竖直放人高压灭菌锅内灭菌。在压力升至0.05MPa时排放冷空气， 然后再在0.11MPa下灭菌20~30min。灭菌时间不能过长，否则易破坏培养基的营养成分，使酸度增加、凝固不良。灭菌后待温度缓慢降到60℃时再摆成斜面，以防冷凝水在管内积聚过多。
6.摆斜面
摆放方法是将1cm厚的木板或钢板平放于平台或地上，然后将灭过菌的试管口朝上摆放于板上冷却凝固即成斜面培养基。摆放后在试管上覆盖棉布保温也可减少冷凝水过多。斜面长度占试管总长的1/2，最多不超过3/5。
