食用菌栽培的菌种生产是个纯培养过程，要求培养基必须是完全无菌的状态，这样接入的菌种在一个只有自体生物的营养环境里，在没有竞争拮抗排异的状态下健壮生长，其发挥最大的生物生长势能，这样得到的新的大量的优良的菌丝体才是高质量的菌种，才能用于生产才可能在将来的生产上发挥该物种最大的生物效率。
所以，菌种生产当中的培养基的无菌状态是至关重要的，生产程序上对培养基要做杀菌处理，对培养基杀菌处理的方法选用可操作性最强的方法，就是高压蒸汽杀菌的方法。
高压蒸气杀菌方法的杀菌原理，是利用密闭蒸气产生大于大气压的压力后，蒸气温度随压力的增加而增加的效应，利用高湿热蒸气传递积累温度杀灭微生物。
高压蒸汽杀菌方法的工具设备就是高压蒸气杀菌锅。这种设备市场上有售，容积有大有小，产气供气控温方法各异。但是，根据用户使用信息反馈和调查，规模化生产当中使用的高压蒸气杀菌锅，质量、灭菌效果和售后及价格优势当属山东省诸城市良工机械有限公司的专利产品---免锅炉煤柴两用节能环保一体化灭菌锅。
笔者从1987年开始从事食用菌栽培事业26年有余了，现供职于山东省烟台市栖霞市海德利食用菌科技有限公司任工艺技术总工一职，我公司正在使用山东省诸城市良工机械有限公司的产品高压蒸气杀菌锅，下面，笔者就以该公司的节能型设备为例，谈谈菌种生产的杀菌程序，谈一谈菌种培养基完全无菌的状态是如何实现的。
一、选型
食用菌栽培规模化生产当中的菌种生产工作，是个批量生产过程，由于单次生产量大，所以都是使用较大型的杀菌设备，可以根据生产量选用容积为一两立方的、也有容积几十立方的设备。
山东省诸城市良工机械有限公司的免锅炉煤柴两用节能环保一体化灭菌锅，有两大产品优势，免锅炉供汽，该款杀菌锅自体配有以煤炭、废旧菌包或木柴等为燃料的自加热产汽的一体性节能环保装置，常温高温均可使用，不仅减免了安装锅炉的成本、省去了司炉工的雇佣费用，更重要的是其升温快同时节省燃料(一锅1万袋杏鲍菇仅需250kg煤碳)，使每个菌包的灭菌成本降到了2分钱左右，比常规的杀菌锅节能50%以上，效果非常明显。并且这个设备在工作过程中无烟尘，并已经获得了山东环保厅及环保学会“环保及科技进步三等奖”，为环保节能推荐产品。大家可以根据自己的生产规模选用型号配置。
二、调试
工作人员初次使用设备前，须详细阅读设备使用说明书，严格遵守高压蒸汽灭菌设备使用说明书中的操作规程操作使用。
每次使用前须先检查设备是否完好。
三、操作流程
1、置放被杀菌物时，不可过于拥挤，单元个体间可使蒸汽顺利通过。
2、为了缩短杀菌操作时间，杀菌设备可预加热。
3、杀菌设备封闭时，注意螺栓不可拧得过紧，以免密封垫老化。
4、为了缩短杀菌操作时间，升温封闭后，可预打开排气阀，使空气在加温的过程中便向外逸出，待有蒸汽冲出时，关闭排气阀;待容器压力表指示容器内气压力达0.5kg/C㎡时，暂时控制加热源，打开排气阀放气，待压力表指示压力降到0后，开足加热源，待排气口有蒸汽冲出时关闭排气口，进入杀菌升温状态。
此环节要求容器内彻底排除空气。
待压力表显示达到要求工作压力(不得超出设备说明书额定的工作压力)后，根据设备功能调节热源控温、保持时长杀菌。
5、杀菌结束后，关闭升温系统，使压力表指针缓慢归零，这时打开舱门的封闭螺栓，检查舱门是否容易打开;如果杀菌操作时未排净空气，容器内形不成负压舱门可轻易打开，这样须重新杀菌操作;如果舱门由于负压的作用不能打开，然后由小到大地打开排气阀缓慢放进空气，然后半开舱门留一条宽窄合适的缝隙，让蒸汽逸出，烘干被杀菌物的包扎材料，然后根据被杀菌物的操作规程对其处理，完成杀菌操作。
6、杀菌结束后，排净容器内的水，恢复使用前状态。
四、流程关键环节注意事项
1、每次使用前进行安全、效能检查。
2、当杀菌仓内气压达到0.15MPa时温度应该是126-127℃(如果比例失调说明杀菌仓内空气没有排尽)，这时开始杀菌计时。
3、一般原料培养基杀菌时长1.5小时，麦粒、玉米粒和发酵培养基杀菌时长2.5小时，木条菌种杀菌时长要3.5小时以上。
4、杀菌记时后，维持杀菌仓内蒸汽压力在0.14-0.16MPa之间、温度在125-127℃之间持续杀菌。其波动速率愈小愈好，防止杀菌仓内空间和被杀菌物容器空间之间快速出现压力差，造成被杀菌物容器封口被冲破的结果。
中间不得有任何时长的蒸汽压力和温度超出上述范围的情况出现。
5、杀菌结束后，控制热源，使杀菌仓内自然降压至零(降压愈慢愈好，防止杀菌仓内空间和被杀菌物容器空间之间快速出现压力差，造成被杀菌物容器封口被冲破的结果)，而后，方可开仓取出被杀菌材料。
6、杀菌期间杀菌温度如果出现低于123℃的情况，每持续1分钟时间，温度回升后增加杀菌时间5分钟。
五、灭菌程序的质量标准
1、培养基瓶或袋无破损、变形、通气孔塌陷堵塞、封口脱落开放等的损坏。
2、杀菌彻底，培养基袋内无任何生物活体。
