【书摘】
4．菌种制备
(1)接种场所的消毒
菌种制备的过程需要在预先消毒过的接种箱或接种室内进行。消毒就是采用物理或化学的方法将有害微生物杀死，一般采用的方法有药物熏蒸、药液喷雾或紫外线照射，若三者并用，效果更佳。
接种箱的消毒 接种箱多用于分离菌种和小规模的接种。
使用前先用0．25%新洁尔灭溶液将箱内揩擦干净，然后用甲醛熏蒸消毒。一般每立方米空间需用40%甲醛溶液8毫升和高锰酸钾5克气化熏蒸。熏蒸时将接种工具、器皿放人箱内，把称好的高锰酸钾放人罐头瓶内，再将甲醛倒人，迅速关好接种箱，二者反应产生的热量将甲醛变为蒸气而充斥整个箱体，就这样密闭8~12小时。工作前再用紫外线灯照射20～30分钟，以达到空间杀菌的目的。照射结束后，隔30分钟就可以开始工作。
如果接种箱只用于少量的接种工作，则在使用前30分钟。喷一次5%石炭酸液，并同时用紫外线照射20—30分钟就可以了。因为接种时试管口还有酒精灯火焰封口这一关，一般被污染杂菌的可能性不大。
接种室的消毒 接种室空间较大，使用前一天必需进行熏蒸消毒杀菌，方法同接种箱的消毒。由于甲醛对人的眼、鼻有强烈的刺激作用，可在熏蒸后12小时，量取与甲醛液等量的氨水，倒人容器迅速放人室内与甲醛中和，可以减少甲醛的刺激作用，该工作至少在接种前2小时进行。每次接种前，常用5%石炭酸溶液喷雾，用以杀菌和沉降空气中的微粒及杂菌孢子，使室内空气净化。之后，打开紫外灯照射l小时。照射结束后，隔30分钟再人室作业。若连续使用
接种室，必须重新进行全面消毒。
(2)接种方法
原种的接种 接种箱消毒之后，就可以开始接种。操作之前要将手洗干净，再用75%酒精棉球擦手。操作时，左手拿起试管，右手拿接种针，将接种针放在酒精灯火焰上灼烧。冷却后，在酒精灯火焰附近拔开试管棉塞，试管口向下倾斜，用酒精灯火焰封口。接着把接种针伸人斜面菌种的试管内，钩取一小块带培养基的菌种块，在菌种块出入试管口时不要接触管壁或管口，也不要过火焰，以防烫死或烧伤菌种。迅速把菌种块移人试管培养基的中部，把棉塞头的四周在火焰上烧一下，然后立即将棉塞塞人试管口。塞人后将棉塞旋转一两下，使之与管壁紧贴(图3．17)。根据斜面的大小，每支斜面菌种可扩大移植20～50支。转管繁殖的次数不宜过多，否则菌丝老化，菌种质量下降，给生产带来不利。接好试管放人恒温箱避光培养。
对于分离得到的原种。必须进行纯化。纯化方法是在菌落的边缘挑取先端菌丝体，移植到试管斜面培养基上在适温下培养。如此移植2～3次就达到了纯化的目的。
母种的接种 制作母种的目的，就是将优质的原种进一步扩大繁殖，增加菌种的数量以满足制栽培种的需要。接种的要求和基本操作与原种接种相同。母种的培养基多用锯木屑、棉籽壳、农作物秸秆、谷粒等物质，盛装容器多用菌种瓶、罐头瓶或塑料袋，经高压灭菌后，必须先冷却再接种，一般一支原种可接4～6瓶母种(图3—18)。接好的母种贴上标签放人培养室避光培养，一般经30～45天，菌丝即可长满瓶。银耳母种的菌龄应控制在15天左右。
