易菇网讯：“建议生产用虫草类真菌不仅需要形态鉴定，还需要采用分子生物学手段鉴定到种和菌株。”10月26日，在2018第二届全国虫草大会“泛亚·虫草产业发展高峰论坛”环节中，浙江泛亚生命科学研究院副院长李春如在谈及菌株的影响问题时说道。会上，李春如从菌（种）株、质量控制、研发思路和策略探讨等方面向与会代表介绍了药食用虫草类真菌在研发和生产过程中等遇到的相关问题。
“菌种的影响是非常重大的，以食用安全性为例，不同真菌物种因为各自基因差异，其编码的产物千差万别。有些具营养保健功能，而有些真菌堪称毒药，如毒蘑菇，真菌的产毒素是由基因所控制，其产毒素能力受真菌种类及菌株、基物类型、环境条件等因素影响。”李春如表示，产生毒素的真菌种类主要有曲霉菌属（Aspergillus）、镰刀菌属（Fusarium）、青霉属（Penicillium）这三类真菌。
李春如还向现场的代表介绍了三种真菌的相关情况。他表示，很多曲霉菌引起农产品、食品和饲料发霉变质，共有15种曲霉菌产生24种毒素。以黄曲霉菌最为普遍，且所产毒素毒性最大，具强烈的致癌性，产生的毒素主要是香豆素类和丁烯酸内酯化合物以前者最多；镰刀菌本属真菌分布甚广，且多为腐生，但有不少种是重要的植物病原菌，也有少数是人和动物的条件致病菌，其中有16种镰刀菌产生18种毒素，主要是酚大环内酯和单端霉烯族化合物，以后者最多；青霉菌本属真菌，种类多，分布极广。青霉菌有很大经济价值，许多是有害菌，引起粮食、食品、饲料、水果霉变，共有28种青霉菌产生34种毒素，尤以米上最多，其次是谷类及制成品，如饼，酱团和饲料。毒素种类及化学组成最多，主要是蒽醌、丁烯酸内酯、环氯肽、吡喃酮及吡喃结构的化合物。“除了这三种之外，还有麦角菌、稻曲病菌、绿色木霉、交鏈孢、葡萄穗状霉、漆斑霉菌、长蠕孢霉，球毛壳菌、丝核菌、节卵斑霉、头孢霉、交鏈孢、粉红单端孢霉、黑附球霉和芽枝霉等其它产毒真菌。”
报告中，李春如表示虫草类真菌在栽培过程中会受到其它真菌的污染或者原料带入，需要对栽培过程进行精确控制、有效防控污染、进行全程监控、沉降菌检测、和相关真菌毒素的检测。另外，由于上游菌种鉴定方面的原因，有时不能正确区分标称的虫草类真菌与其近似种的亲缘关系，有潜在的健康威胁。
在谈及菌株的影响问题时，李春如认为同一菌种不同菌株间常表现出遗传多样性，其代谢产物也有明显差异。同一种产毒素真菌，菌株间产毒的差异很大，如产黄曲霉毒素的黄曲霉菌不是所有菌株都产毒，据Matles报导，自然界中的野生菌株只有10%能产毒素。禾谷镰刀菌菌株间产毒素的能力也存在很大差异，对原四川11个代表菌株产生二种毒素量的研究结果表明最高的是最低的十倍。以高雄山虫草为例，供试的两个来源于中国的菌株表现出急性毒性，而韩国的菌株栽培的高雄山虫草（韩国又称雪花虫草）获得了韩国的新食品原料证书，获准上市销售。“针对这种情况，建议生产用虫草类真菌不仅需要形态鉴定，还需要采用分子生物学手段鉴定到种和菌株。”
报告中，李春如还向与会代表介绍了同一菌株的传代次数及退化的影响。他讲到，同一菌株在不同培养工艺中其代谢组差异较大，除此之外，即使是同一工艺随着传代次数的增加，不仅在菌落形态和生长速率等生物学性状上表现异常，而且在产孢梗束能力和目标活性物质产量等生产性状也出现下降的退化现象。对蝉花在人工培养基上继代培养菌株的生物学特性的研究结果表明：蝉花菌株在人工培养基上继代培养过程中生物学性状表现出阶段性的变异，菌株的产孢量随着传代次数的增加而下降，菌丝生长速度先随传代次数增加而加快，第8代之后生长速度减缓。第8、9代是蝉花菌株继代培养的转折阶段。总的来看，继代培养过程中菌落局变频率没有规律可循，其变异具有菌株的特异性。
“不同的培养基配方对产毒水平影响显著。如黄曲霉菌在花生、玉米、坚果等种子上产毒素能力最大，但在黄豆种子上则产生毒素少。伏马毒素在玉米上产毒素多，大米上产毒素低。”谈及不同培养条件对产品的影响问题时，李春如表示环境影响产毒菌的生长，也影响产毒量。影响因素有温度、湿度、CO2、O2等。一般说来，温度和湿度低可减少毒素，CO2从0.03%到100%，随CO2增加，毒素含量降低。氧从5% 降到1%可使毒素明显降低。在温暖潮湿地区，花生仁被黄曲霉污染严重，而且产毒菌株的比例高。又如产玉米赤霉烯酮毒素的禾谷镰刀菌，在变温条件下25oC培养二周，再在12oC下培养8周产毒量最大。一般环境湿度大，基物水份含量高，产毒量高。谷物破损严重及霉变程度愈高，农产品和食品中的毒素含量愈高，而健康饱满的小麦抵御产毒菌的侵害越强，带菌量极少，样品中检测不到真菌毒素。
报告最后，李春如就泛亚在研发和生产蝉花过程中如何控制几个关键点做了介绍。他表示，浙江泛亚公司为准确鉴定对于采集分离的蝉花菌种做了大量研究，例如采用经典的形态鉴定方法结合18S rDNA ITS序列比对保证菌种鉴定的准确性，应用RAPD和SCAR方法对生产菌株进行分子标记研究等。他还介绍了泛亚在防菌种变异、退化和复壮措施以及制定严格的全面质量控制的SOP操作规程，对关键环节重点把控等相关措施。
2018第二届全国虫草大会于10月25-27日在杭州龙湖皇冠假日酒店举行，会议由中国菌物学会主办，真菌学国家重点实验室、易菇网、中国菌物学会菌物产业分会、中国菌物学会虫生真菌专业委员会、杭州中美华东制药有限公司承办，浙江五养堂药业有限公司、杭州宝臻生物技术有限公司、浙江泛亚生物医药股份有限公司协办，武汉菌博会展服务有限公司承担会务执行。本次大会围绕“直面虫草产业的挑战与机遇”主题，安排有学术交流会，虫草产业发展高峰论坛、冬虫夏草产业发展高峰论坛、蛹虫草产业发展高峰论坛、虫草产业企业家论坛，虫草产业新产品新技术展览，并组织代表前往杭州中美华东制药有限公司进行参观，同期还举行了“中国菌物学会虫草类产业分会”成立筹备会议。本次大会凝聚了虫草行业最权威的专家以及最具实力的企业家，与会人员提出我国虫草产业产值突破千亿元指日可待，是虫草行业具有历史意义的一次盛会。
