室内培育猴头菇的方法有瓶栽和开放式等种，培养料有锯木屑，棉籽皮等：猴头菇菌丝体生长的适宜温度是22～28℃；子实体生长的适宜温度是18～22℃，温度过低则子实体生长速度缓慢。菌丝体对湿度的要求为60％，子实体对湿度的要求为85～95％。
一、菌种分高培育猴头菇首先要进行菌种分离。菌种分离有孢子分离和组织分离两种方法。孢子分离是在无菌的条件下采集猴头菇成熟后将散放的孢子，作为培育菌丝的原料。组织分离是取新鲜幼嫩的子实体，放入接种箱，在无菌的条件下切开菇体，取中间充实、肉质较好的一块组织，约米粒大小，放入试管中的斜面培养基上。培养基用去皮的马铃薯和洋菜，葡萄糖拌匀做成，比例为200：20：20，加水1000克，将pH值调至5．5～6，然后分别装入玻璃试管，不要装满，经高压消毒灭菌并使之形成倾斜面。经接种后将试管放入25℃的恒温箱培养3天，接种块即开始萌发菌丝；20～25天时丝茵长满培养基表面，即可挑选生长良好，无杂菌的培养，待菌丝长满试管培养基的斜面，即可开始培养栽培种。
二、栽培种的培养栽培种的培养料可用锯木屑（不含芳香油或杀茵剂）或棉子皮等，配料比例可选择：
（1）锯木屑78％、麸皮20％、石膏l％、白糖1％；
（2）棉子皮98％、石膏l％、白糖1％；
（3）鲜酒糟80％、麸皮10％、糠9％、石膏粉1％（加无机盐营养液，配方为：硫酸铵3％、磷酸二氢钾1％、硫酸镁0．1％，用乳酸调至pH值为4。
（4）将培养基料加60～65％水拌匀，手捏时指缝间有水渍而不滴为宜。然后，装瓶至瓶肩处捣实，在14．7牛顿压力下灭菌1小时。灭菌后用无菌操作挑取斜面菌种一块，投入培养基瓶内，使温度达到20～25℃，空气相对湿度达到60～65％，塞上棉塞。约30～40天，菌丝长满培养料，形成菌膜。当菌膜上子实体原基接近棉塞时，拔去棉塞。
三、子实体的培养开放式栽培猴头菇系将阔叶树木屑在高压下消毒，或者在锅中煮20分钟，捞出沥去水份，待凉后直接拌入40％左右的瓶内菌种，拌好后装入塑料袋或用薄膜包起来。袋口或包扎口装上棉塞通气，放在10℃以下的低温中进行培养，待长成菌块后，揭去薄膜，再在自然温度下继续培养，几个月后即可长出猴头菇。这种方法和瓶栽产量相近，但节约菌种、瓶子，可较大规模生产。瓶栽猴头菇则在棉塞拉开后，室温保持在18～20℃，如温度过高时，中午关闭门窗，早晚温度较低时通风；如温度低时，可在中午通风。室内湿度保持在85～95％，过低时可在地面泼水，保持经常潮湿，同时每天还可在空间喷雾3～4次，半个月后即可形成子实体。用锯木屑和棉子皮做培养料相比，棉子皮具有发菌快，杂菌少、子实体形成早等特点，比锯木屑提前半月左右形成子实体。
四、采收子实体开始萎缩衰老停止生长发育，表面由白变褐，即可采收，晾晒。如食用，可在孢子散放前采收，可免去孢子苦味。瓶栽猴头菇在上述相同管理条件下，每瓶可采收三个，所余菌丝体可制药。
