灭菌后的菌袋，移至接种室，袋温自然降到30℃以下时即可接种。接种前搞好接种室内卫生，用硫磺粉10－15g/m3熏蒸24小时灭菌，而后打开门窗，放出烟雾，菌袋入室。接种工具和原种应在接种前放入接种室，关好门窗，打开臭氧发生器开关，半小时后关闭，再过半小时后接种人员穿干净的工作服，洗净双手，进入接种室接种。用75％的酒精棉球将接种工具擦拭一便，进行消毒，点燃酒精灯，将接种工具在酒精灯火焰上灼烧灭菌后，插在工具架上备用，然后用酒精棉球擦拭双手，开始接种。采用五人合作接种方式，一人供种，四人解袋系袋，接种后的菌袋放入培养室堆叠摆放成排，每排4－5层，排与排间留通道便于管理。
接种后在培养室摆放好菌袋，发菌管理主要是控温和通风，及时检查。培养室内挂温度计，菌袋堆叠层中间插温度计，随时观察温度变化，尽可能控制菌袋温度在23－25℃，室温在22－23℃，以利发菌。菌丝开始生长时会放出热量，袋温不宜高于30℃，避免温度高“烧菌”，通过倒堆和通风散热降低温度。冬季发菌气温低，培养室生火加热增温，中午通风，以保温为主。
