复方灵芝降糖胶囊对胰岛B细胞形态学的影响
广州中医药大学学报 2000年第1期第17卷 实验研究
作者：陈文良 黄萍 吴清和 徐鸿华 荣向路 韩坚
单位：广州中医药大学中药学院，广州 510405
关键词：@复方灵芝降糖胶囊/药理学；灵芝/药理学；黄芪/药理学；糖尿病/中药疗法；胰岛/药物作用；疾病模型，动物
摘要：为探讨广州中医药大学新药开发研究中心研制的复方灵芝降糖胶囊(灵芝、黄芪、三七等中药组成)治疗糖尿病的作用机理，观察该药对链脲霉素所致糖尿病模型大鼠的胰岛B细胞形态等方面的影响。结果表明，复方灵芝降糖胶囊可提高实验性糖尿病大鼠胰岛B细胞体密度(P＜0.001)，对受损的胰岛B细胞具有修复和再生的作用，这可能是复方灵芝降糖胶囊治疗糖尿病的机理之一。
中图分类号：R285.5 文献标识码：A
文章编号：1007-3213(2000)01-0051-04
Effect of Compound Lingzhi Jiangtang Capsule on Morphology of Islet B Cell in Rats
CHEN Wenliang
(Shenzhen Pharmaceutical Factory of Chinese Materia Medica,Shenzhen 518029,China)
HUANG Ping,WU Qinghe,XU Honghua,RONG Xianglu,HAN Jian
(Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510405,China)
Abstract:To explore the mechanism of Compound Lingzhi Jiangtang Capsule for diabetes mellitus,the effect of Compound Lingzhi Jiangtang Capsule on morphology of islet B cell in rats with diabetes mellitus was studied.Results showed that Compound Lingzhi Jiangtang Capsule could increase the volume density of islet B cell(P＜0.001) and promote the repair and regeneration of the damaged islet B cell.
Key words:@ COMPOUND LINGZHI JIANGTANG CAPSULE/pharmacology;LINGZHI/pharmacology;ASTRAGALUS MEMBRANACEUS/pharmacology;DIABETES MELLITUS/TCD therapy;ISLETS OF LANGERHANS/drug eff.;DISEASE MODELS,ANIMAL
由广州中医药大学新药开发研究中心研制的复方灵芝降糖胶囊主要由灵芝、黄芪、三七等药物组成，具有益气养阴、补脾益肾、活血化瘀的功效，主治糖尿病及其合并症。本研究从药物对胰岛B细胞形态的影响等方面，探讨了复方灵芝降糖胶囊治疗糖尿病的作用机理。
1 实验材料
1.1 药物 复方灵芝降糖胶囊，每粒含生药4.46g，由广州中医药大学新药开发研究中心提供，批号980428。使用时以蒸馏水配制成所需浓度。优降糖：天津市力生制药厂产品，批号9703004。
1.2 动物 SD系大鼠(合格证号：97A018)，由广东省卫生厅医用动物场提供。
1.3 试剂与仪器 链脲霉素：进口分装，美国Sigma公司产品，批号980420。小鼠抗人和动物胰岛素血清：进口分装，武汉博士德生物公司产品，批号SA1021。二氨基联苯胺(DAB)，美国Sigma公司产品，批号DS7028。
2 实验方法与结果
选取健康大鼠32只，雌雄各半。参照文献［1］方法，用链脲霉素给大鼠尾静脉注射诱导出糖尿病模型，以血糖值c≥10mmol/L的大鼠作为糖尿病模型，随机分为模型组、优降糖组、复方灵芝降糖胶囊低、高剂量组，每组动物各8只，另取未经造模的同批大鼠8只作为正常对照组。每天灌胃给药1次(对照组和模型组给蒸馏水)，第20天灌胃给药后1h将动物脱颈椎处死，迅速剖腹取其胰尾组织，Bouin液固定，石蜡包埋，制成6μm和4μm厚的连续切片，分别作HE及胰岛B细胞免疫化学染色。
2.1 HE染色 HE染色结果发现，正常组切片胰岛数目较多，轮廓规则整齐，胰岛内细胞排列整齐，胞浆饱满，细胞界限清楚。模型组切片胰岛数目较少，胰岛内形态欠规则，细胞排列紊乱，常有细胞缺失、塌陷。在400倍镜下还可更清楚地看到以下形态：正常组切片胰岛内充满蓝色的B细胞分泌颗粒，细胞排列紧凑、整齐，分布均匀。模型组切片胰岛内B细胞有严重的脱颗粒现象，少数细胞塌陷、缺失，排列不规则。阳性组和复方灵芝降糖胶囊用药各组均有不同程度的改观(见图1)。
1 胰岛B细胞HE染色电镜切片图
A.正常组；B.模型组；C.复方灵芝降糖胶囊高剂量组；D.复方灵芝降糖胶囊低剂量组
2.2 胰岛B细胞免疫化学染色 胰岛B细胞免疫化学染色片镜下阳性反应物呈棕黄色，正常胰腺为阳性对照，阴性对照以PBS缓冲液代替一抗。然后取各组胰岛B细胞免疫化学染色切片，每片随机取3个胰岛视野参考Weibel方格系统计数法［2］，应用双方形网格测试板直接在显微镜下计数，求出B细胞体密度。
B细胞体密度p=PB/PI×100(PI为落在胰岛内点数，PB为落在B细胞内点数)。
2.2.1 免疫组化染色
结果见图2。
2 胰岛B细胞免疫组化染色电镜切片图
A.正常组；B.模型组；C.复方灵芝降糖胶囊高剂量组；D.复方灵芝降糖胶囊低剂量组
正常组：胰岛一般为圆形或长椭圆形，体积大小不一，个别胰岛形态不规则，有呈半月形、弯曲的圆子柱状等形态。B细胞(免疫反应阳性细胞)主要分布于胰岛中心部位，排列较规则，一般呈圆形，大小均匀，胞质较多，胞浆中充满粗大的胰岛素染色颗粒，均匀地散布于整个胰岛，胞核不着色，但可清楚地观察到其轮廓，多呈圆形或椭圆形。
模型组：染色片中胰岛素染色颗粒较少，B细胞松散排列，分布不规则，有的胞浆中胰岛素染色颗粒明显减少使细胞呈空虚状态。
优降糖和复方灵芝降糖胶囊高剂量组：染色片中胰岛B细胞在胰岛内的分布、细胞形态、染色颗粒的分布等方面与模型组比较均有不同程度的改观，胰岛B细胞染色颗粒较多，胞质饱满。
复方灵芝降糖胶囊低剂量组：染色片中胰岛B细胞在胰岛内的分布、细胞形态、染色颗粒的分布等方面与模型组比较未发现明显的变化。
2.2.2 定量分析
结果见表1。
表1 复方灵芝降糖胶囊对糖尿病模型大鼠胰岛
B细胞体密度(p)的影响()
组 别 N/只 w/(g?kg-1) p/%
对照组 8 - 68.84±17.49
模型组 8 - 21.13±7.60△△△
优降糖组 8 0.005 43.00±15.54**
灵芝降糖低剂组 8 1.84 25.58±10.30
灵芝降糖高剂组 8 7.40 56.40±9.16***
△△△与对照组比较P＜0.001；**与模型组比较P＜0.01，***P＜0.001
表1显示，复方灵芝降糖胶囊高剂量组可提高大鼠B细胞体密度(与模型组比较P＜0.001)；低剂量对大鼠B细胞体密度的改善无明显作用(P＞0.05)，优降糖亦可提高大鼠B细胞体密度(与模型组比较P＜0.01)。
3 讨论
糖尿病是一种急性或慢性的代谢障碍性疾病，主要是由于胰岛素的绝对或相对缺乏所引起。已有大量事实证明，无论是Ⅰ型糖尿病还是Ⅱ型糖尿病，其发病均与胰腺内分泌细胞功能异常有关。胰内分泌腺含有几十万个内分泌腺体―angerhans氏岛(即胰岛)，它分散地分布在胰外分泌腺体中。目前的研究已经证实，胰岛中至少有4种细胞，即A、B、D及F细胞，而且这些细胞的分布、功能又有很大差别。目前所知，与糖尿病关系比较密切的主要是在胰尾部分布较多的A细胞(约占20%)和B细胞(约占75%)，前者分泌的胰高血糖素和后者分泌的胰岛素(RI)、C肽等对体内的血糖调节起着重要的作用。糖尿病的发生与胰岛组织细胞功能障碍，尤其是B细胞的功能不足有很大关系。随着细胞组织免疫化学染色技术的飞速发展，在糖尿病机制的研究中有关B细胞形态学的探讨越来越受到人们重视。有学者在电镜下观察到，胰腺B细胞中β颗粒是通过“细胞呕吐”(Cell Vomiting)的方式排出的，围绕颗粒的膜先与细胞膜融合，然后融合部位裂开，颗粒就从细胞排出，离开细胞进入细胞外间隙，再经过毛细血管内皮进入血液循环。B细胞内β颗粒的数量与胰腺的胰岛素含量平行，当胰岛素分泌后，可看到B细胞脱颗粒现象(颗粒减少)［3］。这样就从微观层面上证实了胰岛结构与功能的紧密相关性。
链脲霉素(STZ)对动物胰岛B细胞有特异性的杀伤作用，已被广泛用于制备实验性糖尿病动物模型。在本实验中所采用的胰岛两种染色方法结果显示，模型组切片与正常组切片比较在形态学上有很大差异，模型组大鼠的染色片中胰岛周围组织结构紊乱，胰岛数目少，B细胞松散排列，分布不规则，有的胞浆中胰岛素染色颗粒明显减少使细胞呈空虚状态。阳性组和复方灵芝降糖胶囊组的染色片中胰岛及胰岛B细胞的形态均有不同程度的改观。
在采用免疫组化方法对其进行B细胞体密度的计量研究中发现，模型组B细胞体密度与正常比较明显减少，复方灵芝降糖胶囊对大鼠的B细胞体密度有明显改善作用。
本研究证明复方灵芝降糖胶囊对STZ造成的大鼠胰岛B细胞的损伤有一定的治疗作用，对保持胰岛B细胞的细胞结构完整、维持正常的生理功能有着重要的作用，从而保证了B细胞合成、释放胰岛素各环节功能正常，在一定意义上防止了糖尿病的发生。研究结果提示，促进受损胰岛B细胞的修复和再生是复方灵芝降糖胶囊治疗糖尿病的机理之一。
基金项目：广东省重点科技攻关项目(1997-1)
作者简介：陈文良，男，1973年出生，硕士；
参考文献：
［1］大西r之，山田俊雄，山田和雄，他.ストレプトゾトシンおょびサイプロヘプタジンによゐ实验的糖尿病モデルの比较［J］.日本药理学杂志，1986(87)：105
［2］Weibl E R.Sterological Methods.In:Practical methods for biological morphology［M］.London：Academic Press,1979.91
［3］杨钢.内分泌生理与病理生理学［M］.天津：天津科学技术出版社，1996
