灵芝多糖锗的抗肿瘤及免疫增强作用研究
中国生化药物杂志 2000年第4期第21卷 论 著
作者：牛建伟 谢平
单位：牛建伟（河南省医药工业研究所 开封，475003）；谢平（开封医学专科学校）
关键词: 灵芝多糖锗， 肿瘤抑制率， 巨噬细胞活性
摘 要 目的：研究灵芝多糖锗对实验性肉瘤和腹腔巨噬细胞活性的影响。方法：利用接种肉瘤S180腹水型诱导的小鼠肿瘤模型，检测对S180肉瘤的抑制率；利用酸性磷酸酶测定法，检测对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响。结果：灵芝多糖锗可抑制小鼠S180肉瘤的生长，能增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的活性。结论：灵芝多糖锗具有抗肿瘤及免疫增强活性。
中图分类号 Q93-33
Study on Effects of Saccharum Germanium of Glossy Ganoderma on Immunity and Antitumor
Niu Jianwei Xie Ping
（Henan Institute of Pharmaceutical Industry Kaifeng 475003）
Abstract Purpose：To study the effects of saccharum germanium of glossy ganoderma on experimental sarcoma and on the activity of rhagiocrine cells in abdomial cavity.Methods:By vaccinating ascites inducing mouse′s tumor model of sarcoma,the rate of inhibition of saccharum germanium of glossy ganoderma on the sarcoma was tested.By using the determination of acid phosphatase, the effects of the activity of rhagiocrine cell in the abdominal cavity of the mouse that caught tumor were tested.Results:The compound of saccharum germanium of glossy ganoderma may inhibit the mouse′s sarcoma from growing and increase the activity of rhagiocrine cells in the abdominal cavity of rhagiocrine cells in the abdominal cavity of the mouse that caught tumor.Conclusion:Saccharum germanicim of glossy ganoderma can resist tumour and increase the immunological activity.
Key words Saccharum germanium of glossy ganoderma, Inhibition rate of tumour, Rhagiocrine cell
灵芝多糖锗是利用生物工程技术，将无机锗(GeO2)加入到灵芝菌深层发酵培养液中，通过菌丝体内物质代谢转化，将Ge元素结合于大分子多糖上，成为多糖络合物，经测定其锗与多糖的结合率达90%以上。本文报告灵芝多糖锗对小鼠S180肉瘤的抑制作用和对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响。
1 材料和方法
1.1 材料
灵芝多糖锗、灵芝多糖，发酵液浓缩2倍，河南省医药工业研究所微生物研究室；二氧化锗溶液，浓度为10%，上海建材学院锗研究室。
健康昆明小鼠、纯系NIH小鼠，雄性，体重18～22 g，河南省医学动物实验中心。
小鼠肉瘤S180腹水型，河南省医学科学研究所肿瘤药理研究室。
RPMI 1640,Gibco公司；结晶酚、苯基磷酸二钠，均为AR级，北京化工厂；小牛血清，深圳生化制品厂。
1.2 方法
1.2.1 肿瘤接种 无菌条件下，抽取荷瘤小鼠腹水，显微镜下计数瘤细胞，用生理盐水调至1×107个瘤细胞/ml，混匀后，每鼠右侧腋部皮下注射0.2ml。
1.2.2 对小鼠S180肉瘤的抑制作用 昆明种小鼠接种瘤细胞后，随机分为生理盐水组、灵芝多糖锗组、灵芝多糖组和GeO2组，每组10只。24 h后灌胃给予相应的药物，每12 h一次，0.5 ml/次，连续给药10 d，末次给药24 h后颈椎脱臼法处死动物，取出实体瘤组织并称重，计算肿瘤抑制率。两组间均数比较采用t检验。
1.2.3 对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响 纯系NIH小鼠接种瘤细胞后，按1.2.2项分组、给药，每组12只，连续给药8 d。停药24 h后，每只小鼠腹腔注射RPMI 1640 3～4 ml，注射3次，每次注射后轻揉腹部2～3 min，吸取腹腔液2～3 ml注入同一试管中，混匀，1 500 r/min离心10 min，弃去上清，沉淀加入含15%灭活小牛血清的RPMI 1640，混匀后计数，最后调整细胞数至4×106个/ml。将同组内3只小鼠的腹腔细胞作等量混合，加至24孔培养板中，37℃恒温培养箱内静置30 min，去除非粘附细胞，去离子水冲洗3次，倒置显微镜下观察细胞贴壁情况，反复冻融6次，使细胞膜破裂将酸性磷酸酶释放出来。采用酸性磷酸酶测定法［2］测定巨噬细胞活性。两组间均数比较采用t检验。
2 结 果
2.1 灵芝多糖锗对小鼠S180肉瘤的抑制作用
由表1结果可见，灵芝多糖锗对S180肉瘤小鼠的肿瘤生长具有抑制作用，抑制率33.3%，其平均瘤重与对照组比较具有显著差异(P＜0.01)；灵芝多糖平均瘤重也比对照组轻(P＜0.01)；GeO2虽然也有抑制肿瘤生长的趋势，但与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。
表1 灵芝多糖锗对小鼠S180肉瘤的抑制作用(n=10,±s)
组 别 瘤重(g) 抑制率(%)
生理盐水 1.34±0.16
灵芝多糖锗 0.89±0.281 33.30
灵芝多糖 0.98±0.191，3 27.08
GeO2 1.21±0.162，3 10.34
与生理盐水比较：1P＜0.01，2P＞0.05；与灵芝多糖锗比较：
3 P＞0.052.2 灵芝多糖锗对S180肉瘤小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响
结果见表2。由表2可见，灵芝多糖锗可明显升高S180肉瘤小鼠腹腔巨噬细胞的活性，与对照组比较具有显著性差异(P＜0.01)；而灵芝多糖、GeO2对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响不明显(P＞0.05)，并且二者与灵芝多糖锗比较，有显著性差异(P＜0.01)。
表2 灵芝多糖锗对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响(n=12,±s)
组 别 巨噬细胞活性(U/100ml)
生理盐水 0.25±0.05
灵芝多糖锗 0.36±0.051
灵芝多糖 0.27±0.052，3
GeO2 0.29±0.042，3
与生理盐水比较：1P＜0.01，2P＞0.05；与灵芝多糖锗比较：
3 P＜0.013 讨 论
本文对采用生物工程技术，通过深层发酵培养转化的灵芝多糖锗进行了抗肿瘤及作用机制的研究。结果提示，灵芝多糖锗对小鼠S180肉瘤具有抑制作用，且抑制作用比灵芝多糖、GeO2强，说明在灵芝菌深层发酵培养过程中强化锗，使其通过菌丝体内生物代谢转化为有机态的真菌多糖锗，可使药效提高。
本实验发现，灵芝多糖锗作用下的S180肉瘤小鼠腹腔巨噬细胞的活性明显增强，由于灵芝多糖锗与灵芝多糖、GeO2两组间差异显著，并且后二者与生理盐水对照无差异，推测灵芝多糖锗能使荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞活性增强的成分不是灵芝多糖和GeO2，而是生物转化来的有机态的灵芝多糖锗。并且灵芝多糖锗是通过活化巨噬细胞活性而起到抑制肿瘤细胞生长作用的，提示灵芝多糖锗是一种有潜在抗肿瘤作用的物质，这也为真菌药物的开发和药效活性的提高提供了一条可供参考的新途径。
参考文献
1，徐淑云，卞如濂，陈修.药理实验方法学.北京∶人民卫生出版社，1982∶1115～1144
2，林飞卿，匡彦德，秦慧莲，等.小鼠巨噬细胞激活状态的测定――三种测定法的比较.中华微生物和免疫学杂志，1981，1(4)∶274～278
