1、 培养室应事前灭菌， 即用石灰粉刷墙壁， 用甲醛和高锰酸钾混合进行熏蒸消毒； 培养过程中， 每周用5%石炭酸溶液喷洒墙壁、空间和地面， 连续喷2次， 以除虫灭菌。
2、 温度和湿度要适宜。培养室温度要先高后低。菌丝萌发时， 温度在25～28℃为宜。10天后， 温度降至22～24℃ ， 不超过25℃ 。室内空气相对湿度控制在55%～70%。后期如雨水多， 在培养场地撒些石灰， 以降低空气相对湿度。
3、光线要偏暗。在菌丝体生长阶段， 培养室的光线要接近黑暗， 门窗用黑布遮光或糊上报纸或瓶(袋) 外套上牛皮纸、报纸进行遮光， 有利于菌丝生长。当菌丝发满瓶(袋) 时， 要清除培养室门窗的遮光物， 增加光照3～5天； 如光线不足， 可用电灯照射， 以补充光源， 来刺激黑木耳原基形成。
4、空气要新鲜。黑木耳是好气性菌类， 在生长发育过程中， 要始终保持室内空气新鲜， 每天通风换气1～2次， 每次30分钟左右， 促进菌丝的生长。第五， 及时检查杂菌， 防止污染。在菌丝培养过程中， 料袋常有杂菌侵染， 要及时进行检查， 如发现有菌斑 要用0.2%多菌灵或1%甲醛溶液注射菌斑， 然后贴上胶布， 控制杂菌的蔓延。
