根据“木屑30%、玉米芯16%、棉籽壳22%、麸皮15%、米糠10%、玉米粉5%、石膏2%”的配方，将原材料加入搅拌机后先干拌10min，再加水调节含水量至65%，加水后继续搅拌30min可进入装袋工序。使用立式双冲压自动装袋机装袋，塑料袋规格为对折径17.5cm，装料高度为20cm，装料后料面紧贴塑料袋，存有空隙会导致猴头菇原基形成。利用全自动高压蒸汽灭菌器灭菌，维持121℃、2h，灭菌前需要彻底排除冷空气，灭菌过程中要定时排除冷凝水，保证彻底杀灭菌包中的杂菌。灭菌结束后将灭菌锅前后门都打开一条缝隙，利用冷却室的正压洁净空气把灭菌锅内的蒸汽和热量排出。蒸汽排除完毕后，将菌包拉入冷却室进行空调强制冷却。
菌包中心温度低于24℃后可以在接种流水线上接种，接种时要严格遵守无菌操作规程，尽量缩短打开菌包塑料盖的时间，避免杂菌污染。
接种完毕后，将菌包移入培养室培养，培养室温度为23～25℃，相对湿度为65～70%，CO2浓度<4 000μL/L，避光。培养过程中需每日监测菌包中心温度、菌包之间温度及室内空气温度，需保证菌包中心温度不超过26℃，通过监测多个位置菌包之间温度来判断培养室环境条件均匀程度，如差异较大，则加大内循环风量，尽量使所有菌包处于较为一致的培养条件下。在培养过程中可使用叉车倒垛操作，交换上下层培养床架位置，提高菌包发菌一致性。
