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    胶陀螺母种菌种标准及生产技术规范


    【发布日期】:2011-01-07  【来源】:易菇网  【作者】:毛玉帮
    1、应用菌种:BI-B7菌株。
    2、菌种质量标准及检验方法:
    1)外观标准:
    ①菌丝萌动初期为白色,随着生长发育逐渐变黄,后变黄褐色,进而颜色加深,最后呈明显的“三色”,外缘呈灰白色,向里呈浅黄色,中间呈黄褐色,斜面菌丝连接紧密,无断条状;菌落边缘整齐均匀。
    ②菌丝呈短绒毛状、毡状,菌苔厚、气生菌丝不发达。
    ③菌种保藏时间超过三个月后,菌落颜色加深呈深褐色,边缘变黑,有黑色代谢产物,部分呈瘤状物出现。
    2)镜检:挑取少许菌丝体,放在载玻片上,用美蓝染色,在1600倍镜头下观察,菌丝透明、粗壮、分枝较多,无锁状联合,美蓝单染色着色深,有大量生长点,无空泡,无杂菌污染。
    3)生理生化特征:
    ①生长最佳pH值为6.06.5
    ②生长最适合温度为22℃±12℃;
    ③对氧的要求为好氧性。
    4)测定菌丝生长速度:将经分离获得的菌丝体块,置具PDA培养皿中央22℃±2℃培养,待菌丝向四周边缘辐射蔓延时,用测微尺每隔24h测定菌落直径,直至覆盖全皿为止,从而求出菌丝平均生长速度。如果菌丝生长迅速、整齐浓密、健壮有力,则表明为优良菌种;若菌丝生长缓慢或长速特快、稀疏无力、参差不齐、易于衰老,则表明为劣质菌种。
    5)吃料能力测定:将菌种接入最佳配方的原种培养料中,置于适宜的温湿度下培养,一周后,如果菌种块能很快萌发,并迅速向四周和培养料中生长伸展,则说明该品种的吃料能力强;反之,菌种块萌发后生长缓慢,迟迟不向四周和料层深处伸展,则表明该菌种对培养料的适应能力差
    6Bi-B7均一性检测:将母钟接种于普通PDA培养基上,在最适宜培养条件下培养,其长相和长速差异不大,几乎无肉眼可见的区别,均一性较好。
    7BI-B7稳定性检测:将母种接种于同一培养基上,在同等条件下培养,连续转管7次无明显变化,稳定性较好。
    3、母种生产技术规程
    1)生产母种之前必须做出菇鉴定,不符合母种质量标准的不准投入生产。
    2)母种转试管培养基次数不超过57次,否则必须进行提纯复壮。
    3)培养基配制:
    ①配方:马铃薯200g、柞树木屑(或柞树皮)50g、葡萄糖10g、麦芽糖10g、琼脂25g、蛋白胨1g、酵母膏1g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁g克、VB综合6片、水1000mlpH值自然;
    ②配制方法:按配方精确称量各种营养物质,将马铃薯去皮、挖眼、洗净,切成小方块(约11.5㎝左右),与柞树木屑按规定量定量称取,加水1000ml,进行煎煮,煮到熟而不烂,用四层纱布过滤取汁,再放入琼脂,边加热边搅拌,待琼脂完全溶化后,用湿纱布(二层)迅速过滤,取滤汁补足1000ml,再加其它营养物质煮沸,充分溶解后分装试管,分装试管时,要用玻璃漏斗进行分装试管,尽量避免培养基粘附管口,如培养基不慎粘着管口和管壁,要用纱布擦净,以免培养基粘住棉塞而引起污染,斜面装量为试管(20×200ml)长度的1/4。培养基分装好后,均要塞上棉塞,棉花用普通棉花制作,不宜使用脱脂棉,棉塞的大小、松紧要与试管口径相称,塞入试管的棉塞要紧贴管壁,不留缝隙,松紧度以提起棉塞而试管不脱落,拨出棉塞有轻微的声音为适宜。标准棉塞应是塞头略大,不易变形,入管的部分占塞总长的2/3,外露1/3为宜,然后按5支试管的数量捆住一捆,棉塞外包扎牛皮纸或双层报纸,以防棉塞受潮。
    4、灭菌:将装培养基的试管置于高压灭菌锅中进行灭菌,装锅时,试管均要立放,切勿倾斜或平置,蒸气压力为1.5kg/2,温度达121℃,保持30min,灭菌后,让其压力和温度自然下降以后,取出培养基按要求摆斜面,斜面长度以不超过空白管的2/3为宜,培养基冷却凝固,即成斜面培养基,放在2528℃条件下,空白培养12d,检查无污染后备用。
    5、接种:母种的接种操作一定要严格按照无菌操作规程进行,母种接种必须在接种箱或超净工作台进行,接种箱或超净工作台使用前用2%来苏儿或0.1%新洁尔灭擦拭,并用甲醛或过氧乙酸或气雾消毒盒消毒。甲醛用量为每立方米17ml加入14g高锰酸钾混合熏蒸;若用过氧乙酸,则每立方米空间用15ml,再加入75%的酒精8ml混合后加热熏蒸。接种前一小时打开紫外线灯照射,接种人员进入接种室则必须更换衣帽,接种前双手用75%酒精棉球擦拭,然后点燃酒精灯。接种工具要在酒精灯火焰上方严格灼烧。接种时,将一支斜面母种与另一支待接斜面培养基试管放在左手掌心,再用手指夹紧试管,右手拿接种针,将管口棉塞拨出,试管在火焰上灼烧23s,管口尽量靠近火焰的无菌区,将接种针迅速插入原始母种试管内,迅速挑取豆粒大小的一块菌丝体连同少量培养基,移入待接试管斜面培养基的中央。移菌时,不能让挑取的菌种接触管壁。取出接种针,将两个试管口在火焰上灼烧23s,棉塞塞入试管内部分也在火焰上微燎,并迅速塞入各自试管口。一支母种可扩大转接20支左右试管。转完一支母种,所有接种工具都要用酒精灯火焰再次灼烧,双手也重新用75%酒精棉球消毒。
    6、培养:母种培养一般在恒温箱内进行,培养温度为22±2℃,湿度为5060%,光线黑暗,经710d,菌丝可布满整个斜面,接种后的母种,必须每三天检查一次,有杂菌污染或菌丝生长表现异常的的进行淘汰和作好详细记录,达到母种质量标准的即可生产使用,若不立即使用,则应放在冰箱中在4℃情况下保存备用,每隔34个月转管一次或采用其它有效方法贮存。
    7、母种必须设专人管理,详细作好档案记录,付出母种必须有严格的登记与签字手续。
     
     
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