接种是食用菌生产中的关键环节之一，如果接种技术不过关，即会造成杂菌污染，成活率低而前功尽弃，更谈不上栽培了。无论是菌种分离、传代还是扩繁，都要在无菌条件下严格按照无菌操作规程进行。具体要点如下：
1 人员素质
1.1 接种人员要具备认真、细致、自觉、对事业负责的精神。
1.2 接种人员要牢固树立无菌观念，不能存在侥幸心理，切不可麻痹大意。
1.3 接种人员具备鉴别菌种优势的能力，不合格的菌种不能用于生产。
2 环境消毒
2.1 新制作的或是闲置时间超过15天的接种箱，首次使用前，箱体内、外需用0.1%消霉乐或2%来苏儿彻底刷洗消毒。并必须用甲醛高锰酸钾熏蒸消毒。
2.2 闲置超过30天的接种室和缓冲间重新使用前，墙壁需用2%来苏儿喷湿消毒。对新改建或闲置3个月以上没用的接种室，使用前，室内墙壁要用石灰浆粉刷，水泥地面用清水冲刷。并必须用甲醛高锰酸钾熏蒸消毒。最好用20%氢氧化钠喷洒。
3 空间消毒
将待接种的培养基放入接种箱或接种室后，需对箱或室内进行空间消毒。
3.1 如果是母种传代或接种量少的原种，可利用接种箱同时放入所用的接种工具，然后用化学药物熏蒸和紫外线照射进行空间消毒60分钟。
3.2 如果是量大的原种或三级种生产，培养基放入接种室，同时放入所用的接种工具，再用化学药物熏蒸，同时配合紫外线照射进行空间消毒60分钟左右。
3.3 缓冲间内放置作业服、消毒水、面盆等，接种前要在缓冲间内做好一切准备工作。进入前开启紫外线灯照射60分钟，离开缓冲间进入接种室时仍需开启紫外线灯照射，直至接种结束。
3.4化学药物熏蒸方法：甲醛每立方米17毫升加14克高锰酸钾熏蒸1.5小时后接种，之后连续4次可用气雾消毒盒熏蒸，二着交替使用。每次熏蒸前用消霉乐喷洒一次。
4 携带物消毒
4.1 将母种试管或原种瓶（袋）的棉塞齐管或瓶口剪去，母种试管用75%酒精棉擦洗外壁，原种瓶（袋）用2%来苏水或0.1%克霉灵水清洗外壁，然后随接种人员带入接种箱（室）。
4.2 接种人员经过缓冲间更衣、洗手进入接种室后不得随便出入，尽量少走动和避免空气对流。
5 杀菌
利用酒精火焰进行必要的杀菌。
5.1 首先将接种工具（钩、铲、刀等）在酒精灯火焰上烧灼后，置于清洁的空试管内冷却备用。
5.2 将试管母种或原种瓶放在万能夹上，旋转式取下棉塞，右手端起酒精灯，让火焰接触管口或瓶口，左手将试管或原种瓶慢慢旋转3～4周，然后将试管或原种瓶固定牢。
6 接种
母种分离、传代或扩繁时，试管口要控制在离酒精火焰10cm范围内进行操作。
6.1 用杀菌后的备用接种钩，除去母种斜面的尖端部分以及中央的母种块，随后将接种钩放回母种试管。
6.2 左手持预接种的试管培养基，管口稍向下倾斜，用右手小拇指和无名指、食指和中指持接种钩，从母种试管内钩取直径约2mm大小的种块，放入预接种培养基斜面中央，抽出接种钩，放回母种试管，轻燎右手所持棉塞，旋转式塞入接过菌的试管，由右手放到适当位置，连续完成所有预接种试管。
注意：①每次接种时间最长不得连续超过2小时。②操作时，接种工具尖端和种块不能接触到管口和外部其它物体。工具尖端碰到外面物体要重换工具，种块碰到外面物体则作废。③一般用种量：每支试管母种可扩繁一级种30-40支左右；扩接原种6～8瓶。
7 安全
7.1 点燃的酒精灯不能靠近棉塞、塑料等易燃物。
7.2 点燃的酒精灯要放牢，在操作过程中严防将酒精灯碰翻，以免引起火灾。
7.3 接种箱或接种室利用化学药物进行空间消毒时，要计算空间容积，按照用药说明使用，不许任意加大用药量，避免造成药害。
7.4 紫外线可损伤人体，特别是可引起电光性眼炎。因此，不要在开启紫外线灯的情况下工作，更不能直视正在开启的紫外线灯。
7.5各种消毒药剂要严格选择生产厂家，以免使用伪劣药造成生产损失。